益母草防治慢性肾功能衰竭的实验研究

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目的观察益母草对大鼠腺嘌呤CRF（ChronicRenalFailure）模型的影响，并探讨益母草防治CRF的药效学及机制。方法建立大鼠腺嘌呤CRF模型。设益母草高、中、低三个剂量组，检测血液、生化学指标（RBC、HGB、HCT、Ca2+、P5+、BUN、Scr）、氧自由基指标（MDA、SOD）等参数及肾病理组织学改变。结果益母草中、低剂量组对大鼠腺嘌呤CRF均有改善作用。作用与阳性药尿毒清相似，而高剂量组作用不明显。益母草各组升高SOD、降低MDA作用与维生素E相似。结论适宜剂量的益母草对大鼠CRF有防治作用，其机制可能与抗氧化作用有关。
关键词益母草慢性肾功能衰竭动物模型药效学
ABSTRACT
ObjectiveToobservetheeffectsofMotherwortintreatingCRFinducedbyadenininratsandexplorethepharmacodynamicsandmechanismofMotherwortinpreventingandtreatingCRF.MethodsMakeCRFratmodelsinducedbyadenin.Dividetheratsinthreegroupsandfeedthemwithhigh,middleandlowdosageformsofMotherwort.Testhematologicandbiochemicalindexes（RBC、HGB、HCT、Ca2+、P5+、BUN、Scr），indexesofOxygenfreeradicals（MDA、SOD）andchangesinhistopathology.ResultsMotherwortiseffectiveintreatingCRFinratsgroupstakingthemiddleandlowdosage.TheeffectsofMotrerwortaresimilartothoseofNiaoduqing,buttheeffectsintreatingsCRFratmodelstakingthehighdosagearenotgreat.TheeffectsofMotherwortdosageformsinreducingthelevelofMDAandincreasingthelevelofSODaresimilartoVE.ConclusionModeratedosageofMotherworthaseffectsonpreventingCRFinratsanditsmechanismmayhavesomethingtodowithantioxidation.
KeywordsMotherwortCRFAnimalmodelsPharmacodynamics

益母草防治慢性肾功能衰竭的实验研究
内蒙古医学院（010059）周静，爱民，李兰城

0.前言
益母草是我国传统的中药材，有活血调经、祛瘀生新、利尿消肿等功效[1]。素有“血家圣药”之称[2]。临床常用益母草的活血化瘀作用与其他药配伍治疗CRF，益母草单方抗CRF的药效学研究及动物实验未见报道，本文对益母草防治大鼠CRF病理模型的药效学及机制作了初步研究。
1.实验材料
1.1实验药品：益母草产地：安徽；尿毒清颗粒，广州康巨药业有限公司；维生素E胶丸，浙江医药股份有限公司新昌制药厂；腺嘌呤，上海源聚生物科技有限公司。
实验试剂：超氧化物歧化酶（SOD）测试盒，丙二醛（MDA）测试盒，南京建成生物工程研究所.
1.2动物：Wister-Imamichi大鼠，清洁级，雄性，体重200±30g，合格证号：<京动字>第8806ROII号，由内蒙古大学实验动物研究中心提供。
2.实验方法
2.1益母草水提物制备：将益母草生药分为140g、280g、560g三个剂量组，水提后分别相当于1ml水煎液含益母草生药0.5g、1g、2g。
2.2实验动物分组：Wister大鼠70只，随机分为7组。空白对照组：自来水灌胃0.8ml/100g/d。模型对照组：灌服腺嘌呤200mg/kg/d，相当于0.8ml/100g/d，各治疗组剂量同此。尿毒清组：5g/kg/d。VE组：5mg/100g/d。益母草低剂量组：1g/100g/d。中剂量组：2g/100g/d。高剂量组：4g/100g/d。
大鼠在实验室适应1周后开始实验。给药期间各组大鼠自由摄食饮水，每4天称重1次，放入代谢笼中收集24h尿液。实验周期30天，断头取血测RBC、HGB、HCT值，分离血清测Ca2+、P5+、BUN、Scr值。肾脏用苏木素-伊红（HE）染色，光镜下观察摄片。
取部分肾组织，制成10%的组织匀浆，离心后取上清夜，分别测定SOD（黄嘌呤氧化酶法）、MDA（TBA法），具体步骤按各试剂盒说明书操作。
2.3统计方法：采用SPSS11.0forWindows统计软件进行分析，t检验。
3.实验结果
3.1益母草对大鼠CRF模型血液学指标的影响见表1
模型组RBC、HGB、HCT值与空白组比显著降低（P<0.01）。尿毒清对照组、益母草低、中剂量组与模型对照组相比升高RBC（P<0.05）及HGB、HCT（P<0.01）有统计学意义。益母草低、中剂量组与尿毒清组间无显著性差异（P>0.05）。

表1益母草对大鼠腺嘌呤CRF模型血液学指标的影响（n=10）
组别RBC（1012/L）HGB（g/L）HCT（%）
空白组9.43±0.75167.2±0.530.54±0.06
模型组8.38±0.63142.2±0.390.42±0.02
尿毒清组9.13±0.39*156.0±0.51**0.49±0.02**
VE组8.42±0.34142.6±0.310.44±0.03
低剂量组9.06±0.80*153.8±0.72**0.49±0.04**
中剂量组9.11±0.59*150.8±0.43**0.50±0.05**
高剂量组8.41±0.36146.0±0.540.45±0.04
t-test:与模型对照组相比*P<0.05，**P<0.01

3.3益母草对大鼠CRF模型血生化指标的影响见表2
益母草低、中剂量组与模型组比较BUN、Scr显著降低（P<0.01），高磷低钙显著缓解（P<0.01）。益母草低、中剂量组作用与尿毒清组无显著性差异（P>0.05），益母草高剂量组以上作用不明显（P<0.01）。

表2益母草对大鼠腺嘌呤CRF模型血生化指标的影响（n=10）
组别Ca2+（μmol/L）P5+（μmol/L）BUN（mmol/L）Scr（μmol/L）
空白组2.70±0.152.62±0.418.77±1.3934.60±2.70
模型组2.21±0.105.40±0.2959.93±5.23160.8±11.23
尿毒清组2.55±0.14**4.76±0.33*41.24±8.51**85.4±11.08**
VE组2.34±0.125.44±0.1359.97±6.20161.4±11.63
低剂量组2.50±0.08**4.39±0.59**45.95±7.75**88.0±9.62**
中剂量组2.52±0.11**3.81±0.49**42.79±7.49**86.4±10.09**
高剂量组2.53±0.10**4.83±0.60*52.53±6.91109.6±12.60**
t-test:与模型对照组相比*P<0.05，**P<0.01

3.3益母草对大鼠CRF模型氧自由基有关指标的影响见表3
益母草各组升高SOD、降低MDA作用与模型组比较有极显著性差异（P<0.01），与尿毒清组及VE组比无显著性差异（P>0.05）。益母草各组间体现剂量依赖性，益母草高、中剂量组作用强于低剂量组（P<0.05）。



表3益母草对大鼠腺嘌呤CRF模型MDA、SOD活性的影响（n=10）
组别MDA（nmol/mgprot）SOD（U/mgprot）
空白组1.01±0.11233.06±10.30
模型对照组1.70±0.12127.58±13.19
尿毒清对照组1.12±0.17**208.72±15.58**
VE对照组1.08±0.20**185.20±14.98**
益母草低剂量组1.32±0.18**Δ202.13±10.83**
益母草中剂量组1.09±0.10**209.69±11.28**Δ
益母草高剂量组1.06±0.14**223.67±10.11**Δ
t-test:与模型对照组比较**P<0.01，与VE对照组比较ΔP<0.05

3.4肾脏病理组织学改变：
模型组肾脏体积明显增大，苍白色，皮质髓质界限不清。光镜下可见：结晶颗粒遍布于皮、髓质，皮、髓质交界处尤明显。病变以肾小管损害为主，肾小管上皮细胞变性、坏死、脱落，肾小管扩张。间质纤维化。肾小球萎缩、数量减少。
各治疗组基本病变与模型对照组相似，肾小管的破坏及结晶沉积物均有不同程度的减轻。，益母草高剂量组较重，仍有肾小管变性坏死、异物肉芽肿、多核巨细胞改变，但结晶数量减少。益母草中剂量最轻，肾小管轻度扩张，变性坏死明显减轻，多核巨细胞和结晶散在分布。
4.讨论
益母草临床常用剂量为10-30g，单用可至60g[1]。本实验中大鼠低剂量组1g/100g相当于人56g/70Kg，大鼠高剂量组4g/100g相当于人224g/Kg，约为常用剂量的20倍。实验观察到益母草低、中剂量组与尿毒清组比较作用相似，益母草可以纠正CRF大鼠的贫血、改善氮质血症、缓解低钙高磷电解质紊乱现象，明显减轻腺嘌呤致大鼠CRF的肾损伤，可能与益母草保护肾功能、促进肾生成促红细胞生成素有关，可延缓衰竭肾脏功能进一步恶化[3]。但益母草高剂量组在改善肾功能方面不如低、中剂量组，与文献报道益母草超大剂量或长期使用可造成肾间质和肾小管的损伤[4]一致。
实验研究已经证明氧自由基（OFR）在急、慢性肾脏损伤中有重要作用[5]。本实验证实益母草三个剂量组均可以明显降低CRF大鼠的脂质过氧化产物（MDA）含量，提高SOD活性，呈现剂量依赖性，与VE阳性对照组比较无显著性差别。实验证明益母草有抗氧化作用与VE相近，借此推测益母草可能通过提高机体的抗氧化能力，抑制脂质过氧化作用来治疗CRF。
适宜剂量的益母草对大鼠CRF有改善作用，其机制可能与益母草纠正肾衰时贫血，钙磷失衡，氮质血症，改善肾功能，提高机体的抗氧化能力，减轻氧自由基对肾脏的损伤有关。但临床上不宜长时间、大剂量使用益母草，小剂量应注意配伍。
5.参考文献
[1].中华人民共和国国家药典委员会。中华人民共和国药典（2000版）。北京：化学工业出版社，第一部：237~238。
[2].丁玉慧，周瑞霞。益母草的药理作用与临床应用。中华现代临床医学杂志，2003，4（1）：347-348。
[3].夏晓红，石纪才等。益母草对庆大霉素致大鼠急性肾功能衰竭的防治。中国病理生理杂志，1997，13（2）：183-186。
[4].蔡浙毅，周锦明，葛缘仁。益母草对肾功能及其组织形态影响的动物实验研究。上海中医药杂志，2000，（11）：37-39。
[5].唐政，黎磊石。氧自由基及抗氧化酶与慢性肾脏疾病的进展。《国外医学》泌尿系统分册，1999，19（4）：185-188。



备注:
本文是研究中药益母草对慢性肾功能衰竭的药效学实验研究，是本人研究生论文内容，希望采用并给予指正，谢谢。